13c ureázový test: príprava, výsledky, pozitívny, negatívny

Od objavenia baktérie Helicobacter pylori spojenej s chronickou gastritídou a žalúdočnými a dvanástnikovými vredmi boli vyvinuté diagnostické metódy vrátane ureázového testu, ktorý umožňuje detekciu týchto mikroorganizmov u konkrétneho pacienta, potvrdenie ich účasť na rozvoji gastrointestinálnych ochorení a predpísanie účinnej liečby.

Ureázový enzým ako biomarker infekcie Helicobacter

Baktérie H. pylori sa chránia pred kyslým prostredím v lúmene žalúdka dvoma spôsobmi. Po prvé, poškodením sliznice svojimi bičíkmi sa mikroorganizmy dostanú do jej spodných vrstiev, až po epitelové bunky, kde je pH vyššie (t. j. kyslosť je nižšia). Po druhé, baktérie neutralizujú kyselinu syntézou veľkého množstva katalyticky aktívneho vysokomolekulárneho metaloenzýmu ureázy alebo močovinoovej amidohydrolázy.

Použitie ureázy v diagnostike Helicobacter je možné nielen vďaka cytoplazmatickej aktivite tohto enzýmu, ale aj vďaka vonkajšej interakcii s hostiteľskými bunkami.

Pôsobením ureázy dochádza k rozkladu močoviny v žalúdku na nitrid vodíka (amoniak) a oxid uhličitý (oxid uhličitý). Reagujú s kyselinou chlorovodíkovou v žalúdočnej šťave a vytvárajú okolo H. pylori zónu neutrálnej kyslosti a tiež podporujú metabolizmus bakteriálnych buniek.

Preto je ureáza najdôležitejším faktorom kolonizácie H. pylori v ľudskej žalúdočnej sliznici a detekcia ureolytickej aktivity sa považuje za biomarker virulencie tejto baktérie, ktorý gastroenterológovia – pomocou ureázového testu – používajú na diagnostiku infekcie Helicobacter, ako aj na monitorovanie výsledkov liekovou deštrukciou (eradikáciou) baktérií.

Diagnostika H. pylori zahŕňa invazívne a neinvazívne testy – v závislosti od toho, či je potrebné endoskopické vyšetrenie žalúdka (fibrogastroduodenoskopia) alebo nie. Invazívnym testom je rýchly ureázový test alebo expresný ureázový test (RUT-test), ktorý vyžaduje odber vzoriek tkaniva (biopsia). Najbežnejším neinvazívnym testom je 13C ureázový dychový test (13C-UBT).

Treba poznamenať, že neinvazívna diagnostika H. pylori sa môže vykonať pomocou krvného testu na protilátky (špecificita na úrovni 75 %, citlivosť - 84 %), ELISA testu v moče (s citlivosťou 96 % a špecifickosťou 79 %) a koprogramu na bakteriálne antigény. Viac informácií - Infekcia Helicobacter pylori: protilátky proti Helicobacter pylori v krvi

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Indikácie postupu test ureázy

Kolonizácia žalúdočnej sliznice baktériou H. pylori sama o sebe nie je chorobou, ale faktorom zvýšenej bakteriálnej záťaže tela, ktorá za určitých podmienok môže spustiť rozvoj mnohých patológií žalúdka a hornej časti gastrointestinálneho traktu.

Indikácie pre diagnostiku infekcie Helicobacter, najmä ureázový test, sú spojené s gastritídou so zvýšenou kyslosťou, antrálnou a atrofickou gastritídou, duodenitídou, žalúdočným vredom a vredom dvanástnika, žalúdočným MALT lymfómom. Po endoskopickej resekcii rakoviny žalúdka v ranom štádiu sa môže vykonať histologické vyšetrenie v kombinácii s rýchlym ureázovým testom - FGDS s ureázovým testom.

Gastroenterológovia môžu predpísať ureázový test, ak sa pacienti sťažujú na pocit ťažkosti a nepohodlia v epigastrickej oblasti, časté pálenie záhy po jedle, kyslé alebo hnilobné grganie, horkosť v ústach, nevoľnosť, črevné poruchy, bolesť alebo kŕče v žalúdku.

[ 8 ], [ 9 ]

Príprava

Príprava na dychový test s 13C močovinou spočíva v tom, že pacient vysadí: užívanie antibiotík 4 týždne pred testom a NSAID, inhibítory protónovej pumpy (znižujúce kyslosť žalúdka) a antacída alebo adsorbenty používané na pálenie záhy - najmenej dva týždne predtým. Užívanie akýchkoľvek liekov by sa malo vysadiť päť až šesť dní a pitie alkoholu a fajčenie - tri dni pred testom.

Taktiež sa odporúča vyhýbať sa konzumácii strukovín približne týždeň pred testovaním, pretože fazuľa, hrach, šošovica, sója a fazuľa obsahujú ureázu (ktorá chráni rastliny pred chorobami a hmyzími škodcami).

Večer pred testom je kontraindikovaná neskorá ťažká večera, v deň testovania by ste mali vykonávať bežnú ústnu hygienu a hodinu a pol pred testom by ste nemali nič piť ani používať žuvačky.

[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Technika test ureázy

Technika implementácie:

• Najprv sa odoberie základná vzorka dychu – výdych sa naplní do mäkkej plastovej nádoby (a hermeticky sa uzavrie);
• tekutina s pridanou 13C-močovinou sa užíva perorálne;
• Po 25 – 30 minútach sa odoberie druhá vzorka vydychovaného vzduchu do inej nádoby.

Takto získané vzorky sa analyzujú na hmotnostnom spektrometri so separáciou izotopov v druhej vzorke a stanovením ich koncentrácie. Rozdiel medzi hodnotami v druhej a prvej vzorke sa vyjadruje ako delta (δ) v porovnaní s východiskovou úrovňou. Normálne hodnoty, t. j. záporné hodnoty značeného atómu 13C u neinfikovaných pacientov, sa pohybujú od 0,15 do 0,46 % a pozitívne hodnoty v prítomnosti infekcie sú 1,2 až 9,5 % s rýchlosťou hydrolýzy močoviny viac ako 12 až 14 μg/min.

Zjednodušene povedané: detekcia oxidu uhličitého značeného 13C vo vydychovanom vzduchu naznačuje, že močovina bola hydrolyzovaná ureázovým enzýmom H. pylori, čo v skutočnosti potvrdzuje jej prítomnosť v žalúdku.

Dychový test na H. pylori

13C-UBT test alebo 13C urea dychový test na Helicobacter pylori je jednou z najdôležitejších neinvazívnych metód na detekciu tejto infekcie: so 100 % citlivosťou a 98 % špecificitou je riziko falošne pozitívnych a falošne negatívnych výsledkov v porovnaní s histologickým vyšetrením a testovaním protilátok v krvi o 2,3 % nižšie.

Analýza je založená na hydrolýze perorálne podanej tekutej močoviny značenej atómom uhlíka (stabilný nerádioaktívny izotop) 13C (50 – 75 mg 13C-močoviny zriedenej v 100 ml tekutiny) ureázou H. pylori.

Močovina značená izotopovým indikátorom podlieha v žalúdku hydrolýze za uvoľnenia amoniaku a oxidu uhličitého obsahujúceho značené atómy, ktorý difunduje do krvi a vylučuje sa z pľúc počas dýchania. Značený oxid uhličitý sa zaznamenáva analytickým zariadením - hmotnostným spektrometrom, ktorého činnosť je založená na nedisperznej izotopovo selektívnej spektroskopii, alebo infračerveným spektroskopickým analyzátorom.

Rýchly ureázový test

Rýchly ureázový test (RUT) sa vykonáva počas endoskopického vyšetrenia žalúdka a dvanástnika – pomocou moderných endofibroskopov – a súčasného odberu bioptických vzoriek. Biomateriál sa má odobrať z antrálnej časti žalúdka. Fibrogastroduodenoskopia alebo FGDS s ureázovým testom je teda invazívna diagnostická metóda.

Získaný biopsický materiál sa úplne ponorí do pripraveného štandardizovaného média obsahujúceho agarový gél, močovinu, acidobázický indikátor fenolsulfoftaleín a bakteriostatické činidlo (pridané na zabránenie rastu kontaminujúcich mikroorganizmov a falošne pozitívnych výsledkov).

Ak sú vo vzorke žalúdočného tkaniva prítomné baktérie H. pylori, ureáza, ktorú produkujú, hydrolyzuje močovinu a zvýši pH, čo je jasne viditeľné, keď sa indikátor zmení zo žltej na oranžovú (pri pH 6,8) a fialovú (pri pH > 8). 75 % pozitívnych testov zmení farbu v priebehu 120 – 180 minút a čím rýchlejšie indikátor zmení farbu, tým väčší je počet baktérií. Testy, ktoré sa javia ako negatívne, sa však uchovávajú 24 hodín.

Pozitívny rýchly ureázový test, čo to znamená? Pozitívny RUT test – indikátor sa sfarbí do červena – znamená, že vzorka biopsie umiestnená v agarovom médiu obsahuje najmenej 105 baktérií H. pylori, hoci ich koncentrácia je zvyčajne vyššia.

Citlivosť rôznych modifikácií testov sa pohybuje v rozmedzí 90 – 98 % a špecificita – 97 – 99 %.

Ako poznamenali gastroenterológovia, ak pacientov záver naznačuje výrazne pozitívny ureázový test (tri krížiky), znamená to: pH > 8 a indikátor zmenil farbu za menej ako 60 minút od okamihu ponorenia bioptického vzorku, čo naznačuje veľký počet H. pylori a vysokú úroveň expresie ureázy. Približný počet baktérií je možné spočítať počas histologického vyšetrenia bioptického vzorku pod mikroskopom a ak prekročí 40 – 50 v zobrazenej oblasti, úroveň infekcie sa považuje za vysokú.

Dychový test s 13C močovinou zriedkavo poskytuje falošne pozitívne výsledky a u pacientov s podozrením na žalúdočný alebo dvanástnikový vred sa na potvrdenie diagnózy považuje jeden pozitívny test, zatiaľ čo negatívny výsledok by sa mal potvrdiť EGD s močovinovým testom.