Všetok obsah iLive je lekársky kontrolovaný alebo kontrolovaný, aby sa zabezpečila čo najväčšia presnosť faktov.
Máme prísne smernice týkajúce sa získavania zdrojov a len odkaz na seriózne mediálne stránky, akademické výskumné inštitúcie a vždy, keď je to možné, na lekársky partnerské štúdie. Všimnite si, že čísla v zátvorkách ([1], [2] atď.) Sú odkazmi na kliknutia na tieto štúdie.
Ak máte pocit, že niektorý z našich obsahov je nepresný, neaktuálny alebo inak sporný, vyberte ho a stlačte kláves Ctrl + Enter.
PCR ako metóda diagnostiky genetických ochorení
Lekársky expert článku
Posledná kontrola: 04.07.2025
PCR je nový úspech molekulárnej genetiky, používaný na amplifikáciu DNA a umožňuje rýchle in vitro rozmnoženie špecifickej oblasti DNA (t. j. akéhokoľvek sledovaného génu) viac ako 200 000-krát. Na vykonanie reakcie stačí mať DNA materiál z jednej bunky; množstvo DNA amplifikovanej pomocou PCR je také veľké, že túto DNA možno jednoducho zafarbiť (použitie rádioaktívnych sond po elektroforéze nie je potrebné). Predpokladom pre vykonanie PCR je znalosť nukleotidovej sekvencie amplifikovanej oblasti DNA pre správny výber umelo syntetizovaných primerov.
V súčasnosti je PCR proces v jednej skúmavke pozostávajúci z opakovaných cyklov amplifikácie (reprodukcie, kopírovania) špecifickej sekvencie molekuly DNA s cieľom získať dostatočne veľký počet kópií, ktoré je možné identifikovať elektroforézou. Jednou z kľúčových zložiek reakcie sú „priméry“ – syntetické oligonukleotidy pozostávajúce z 20 – 30 báz komplementárnych k „miestam“ (oblastiam) naviazania (pripojenia) na identifikovanej oblasti matricovej DNA.
PCR prebieha automaticky v programovateľnom termostate - termocykléri (amplifikátore). Trojstupňový cyklus, ktorého výsledkom sú presné kópie identifikovaného úseku matricovej DNA, sa opakuje 30-50-krát v súlade so zadaným programom termocykléra. V prvom cykle oligopriméry hybridizujú s pôvodnou matricovou DNA a potom (v nasledujúcich cykloch) s novo syntetizovanými molekulami DNA, ktoré sa hromadia v reakčnej zmesi. V druhom prípade syntéza DNA nekončí v dôsledku zmeny teploty, ale po dosiahnutí limitu DNA polymerázy amplifikovaného úseku, ktorý určuje veľkosť novo syntetizovaného úseku DNA s presnosťou na jeden nukleotid.
Ako metóda na detekciu získaných molekúl DNA sa používa elektroforéza, pomocou ktorej sa amplifikovaný materiál separuje podľa veľkosti amplikónov (amplifikačných produktov).
PCR sa môže použiť na priame skúmanie umiestnenia podozrivých mutácií alebo polymorfných miest, ako aj na štúdium prítomnosti akýchkoľvek iných špecifických znakov DNA.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]