Všetok obsah iLive je lekársky kontrolovaný alebo kontrolovaný, aby sa zabezpečila čo najväčšia presnosť faktov.
Máme prísne smernice týkajúce sa získavania zdrojov a len odkaz na seriózne mediálne stránky, akademické výskumné inštitúcie a vždy, keď je to možné, na lekársky partnerské štúdie. Všimnite si, že čísla v zátvorkách ([1], [2] atď.) Sú odkazmi na kliknutia na tieto štúdie.
Ak máte pocit, že niektorý z našich obsahov je nepresný, neaktuálny alebo inak sporný, vyberte ho a stlačte kláves Ctrl + Enter.
Analýza polymorfizmu dĺžky reštrikčných fragmentov
Lekársky expert článku
Posledná kontrola: 05.07.2025
Rozšírené používanie rôznych reštrikčných endonukleáz na analýzu chromozomálnej DNA odhalilo obrovskú variabilitu ľudského genómu. Aj malé zmeny v kódujúcich a regulačných oblastiach štrukturálnych génov môžu viesť k zastaveniu syntézy určitého proteínu alebo k strate jeho funkcie v ľudskom tele, čo zvyčajne ovplyvňuje fenotyp pacienta. Približne 90 % ľudského genómu však tvoria nekódujúce sekvencie, ktoré sú variabilnejšie a obsahujú mnoho tzv. neutrálnych mutácií alebo polymorfizmov a nemajú fenotypovú expresiu. Takéto polymorfné oblasti (lokusy) sa používajú v diagnostike dedičných ochorení ako genetické markery. Polymorfné lokusy sú prítomné vo všetkých chromozómoch a sú viazané na špecifickú oblasť génu. Určením lokalizácie polymorfného lokusu je možné zistiť, ktorý gén je asociovaný s mutáciou, ktorá u pacienta spôsobila ochorenie.
Na izoláciu polymorfných oblastí DNA sa používajú bakteriálne enzýmy - restriktázy, ktorých produktom sú reštrikčné miesta. Spontánne mutácie, ktoré sa vyskytujú v polymorfných miestach, ich robia rezistentnými alebo naopak citlivými na pôsobenie špecifickej reštriktázy.
Mutačnú variabilitu v reštrikčných miestach možno zistiť zmenou dĺžky reštrikčných fragmentov DNA ich oddelením pomocou elektroforézy a následnou hybridizáciou so špecifickými DNA sondami. Pri absencii reštrikcie v polymorfnom mieste sa na elektroforegramoch deteguje jeden veľký fragment a pri jej prítomnosti bude prítomný menší fragment. Prítomnosť alebo neprítomnosť reštrikčného miesta v identických lokusoch homológnych chromozómov umožňuje pomerne spoľahlivé značenie mutantného a normálneho génu a sledovanie jeho prenosu na potomstvo. Pri štúdiu DNA pacientov, v oboch chromozómoch, u ktorých je reštrikčné miesto prítomné v polymorfnej oblasti, sa teda na elektroforegrame detegujú krátke fragmenty DNA. U pacientov homozygotných pre mutáciu, ktorá mení polymorfné reštrikčné miesto, sa detegujú dlhšie fragmenty a u heterozygotných pacientov krátke aj dlhé fragmenty.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]