PCR na hepatitídu C

HCV v materiáli bežne chýba.

Na rozdiel od sérologických metód diagnostiky vírusovej hepatitídy C, ktoré detekujú protilátky proti HCV, PCR umožňuje priamo detegovať prítomnosť HCV RNA a kvantifikovať jej koncentráciu v testovanom materiáli. Test má druhovú špecifickosť a vysokú citlivosť: na jej detekciu stačí desať molekúl HCV RNA v testovanom materiáli. Detekcia protilátok proti HCV iba potvrdzuje fakt infekcie pacienta, ale neumožňuje posúdiť aktivitu infekčného procesu (replikáciu vírusu) a prognózu ochorenia. Okrem toho sa protilátky proti HCV detegujú v krvi pacientov s akútnou aj chronickou hepatitídou, ako aj u pacientov, ktorí boli chorí a zotavili sa, a protilátky v krvi sa často objavujú až niekoľko mesiacov po nástupe klinického obrazu ochorenia, čo komplikuje diagnostiku. Detekcia HCV v krvi pomocou PCR je informatívnejšou diagnostickou metódou. Detekcia HCV RNA v PCR indikuje virémiu, umožňuje posúdiť replikáciu vírusu v tele a slúži ako jedno z kritérií účinnosti antivírusovej liečby. Detekcia HCV RNA pomocou PCR v skorých štádiách vírusovej infekcie pri úplnej absencii akýchkoľvek sérologických markerov môže slúžiť ako najskorší dôkaz infekcie. Izolovaná detekcia HCV RNA pri úplnej absencii akýchkoľvek iných sérologických markerov však nemôže úplne vylúčiť falošne pozitívny výsledok PCR. V takýchto prípadoch je potrebné komplexné posúdenie klinických, biochemických a morfologických štúdií s opakovaným viacnásobným potvrdením prítomnosti infekcie pomocou PCR.

Použitie metódy PCR u pacientov s chronickou vírusovou hepatitídou C má veľký význam, pretože u väčšiny z nich chýba korelácia medzi prítomnosťou replikácie vírusu a aktivitou pečeňových enzýmov. V takýchto prípadoch nám iba PCR umožňuje posúdiť prítomnosť replikácie vírusu, najmä ak je konečný výsledok vyjadrený kvantitatívne. Vo väčšine prípadov ochorenia dochádza k vymiznutiu HCV RNA z krvného séra neskôr ako k normalizácii pečeňových enzýmov, takže ich normalizácia nemôže slúžiť ako základ pre ukončenie antivírusovej liečby.

Prakticky dôležité je vyšetriť nielen krvné sérum, ale aj lymfocyty a vzorky hepatobiopsie pomocou PCR metódy na detekciu HCV RNA. Vírusy sa dajú detegovať 2-3-krát častejšie v pečeňovom tkanive ako v krvnom sére. Pri hodnotení výsledkov testu krvného séra na HCV RNA treba mať na pamäti, že virémia môže mať kolísavý charakter (rovnako ako zmeny aktivity enzýmov). Preto po pozitívnych výsledkoch PCR testu môže byť získaný negatívny výsledok a naopak. V takýchto prípadoch je lepšie vyšetriť vzorky hepatobiopsie, aby sa vyriešili všetky vzniknuté pochybnosti.

Detekcia HCV RNA v materiáli pomocou PCR sa používa na nasledujúce účely:

• riešenie pochybných výsledkov sérologických testov;
• diferenciácia vírusovej hepatitídy C od iných foriem hepatitídy;
• identifikácia akútneho štádia ochorenia v porovnaní s predchádzajúcou infekciou alebo kontaktom; určenie štádia infekcie novorodencov od HCV-seropozitívnych matiek;
• monitorovanie účinnosti antivírusovej liečby.

Pacienti s podozrením na vírusovú hepatitídu C:

• darcovia;
• osoby s rizikovými faktormi;
• osoby so zvýšenou aktivitou ALT;
• pacienti s akútnou hepatitídou

Všetky vyššie uvedené vlastnosti hodnotenia výsledkov a prístupov k diagnostike HCV pomocou PCR platia aj pre iné infekcie.

Metóda PCR umožňuje nielen detekciu HCV RNA v skúmanom materiáli, ale aj stanovenie jeho genotypu. Stanovenie genotypu vírusu má veľký význam pre výber pacientov s chronickou vírusovou hepatitídou C na liečbu interferónom alfa a ribavirínom. Laboratórne indikácie na liečbu chronickej vírusovej hepatitídy C interferónom alfa sú nasledovné:

• zvýšená aktivita transamináz;
• prítomnosť HCV RNA v krvi;
• HCV genotyp 1;
• vysoká virémia v krvi (viac ako 8×10⁶ ^kópií /ml).

V súčasnosti je možné kvantitatívne stanoviť obsah HCV RNA v krvnom sére pomocou PCR metódy, čo má veľký význam pre monitorovanie liečby interferónom alfa. Úroveň virémie sa hodnotí nasledovne: s obsahom HCV RNA od 102 ^do 104 ^kópií /ml - slabá; od 105 ^do 107 ^kópií /ml - priemerná, nad 108 ^kópií /ml - vysoká. Pri účinnej liečbe sa úroveň virémie znižuje.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]